PCR-analyysillä: mitä se on? Miten ottaa PCR-analyysillä

Se ei ole niin kauan sitten kehittänyt luotettavan, erittäin herkkä ja nopea menetelmä diagnosoimiseksi erilaisten ihmisten tartuntatautien. Tällainen menetelmä on nimeltään "PCR-analyysillä". Mikä on se, mikä on sen ydin, mitä hän voi tunnistaa mikro-organismeja ja miten se otetaan, kuvaamme tässä artikkelissa.

Historia löytö

Keksi polymeraasiketjureaktio (PCR) on amerikkalainen tutkija Keri Myullis vuonna 1983. Aluksi patentoitu menetelmä diagnoosin mukaan "Cetus Corporation,", jossa hän on toiminut ja sen luoja. Mutta vuonna 1992 kaikki oikeudet ja patentit myytiin yhtiölle "Hoffmann-La Roche." Sen jälkeen, kävi ilmi, että vastaavia tutkimuksia tehtiin rinnan ja raportoi muut Yhdysvaltain biologeja, kuten Elis Chen David Edgar, John RRE. Vuonna 1980 hän käsitellyt asiaa ja Neuvostoliiton tiedemiehet A. Slyusarenko A. Kaledin ja S. Gorodetsky. Siksi määrittää ainoa tekijänoikeuden omistaja ei ole ollut mahdollista. Paljon jäljellä biokemistien ovat vaikuttaneet menetelmien kehittämisen polymeraasireaktiolla Cern patentoinut keksintönsä. Tässä vaiheessa analyysi PCR toteutetaan koko erityisesti varustettu laboratorioissa.

YHTEENVETO PCR diagnostinen

PCR-analyysillä: mitä se on ja miten se toimii? Ydin menetelmä on se, että käyttämällä erityistä entsyymiä DNA-polymeraasin in vitro tilavuus kasvaa tietyn mikrobien ympäristössä. Tehdä tämän toistuvasti moninkertaisesti saatavilla DNA-materiaalin. Siten, että läsnä on patogeeniä näytteessä määrä kasvaa kustannuksella biokemiallisten käsitellä laboratoriossa, ja bakteerit eivät ole vaikea havaita mikroskoopilla.

Miten on tutkimuksen aineiston?

Suorittamaan edellyttämän analyysin:

• DNA-templaattina;
• alukkeet materiaali yhdistää Fragmentin päät;
• lämpöstabiili DNA-polymeraasi entsyymi;
• kemikaalit, toiminnan varmistamiseksi entsyymit;
• puskuriliuosta luomiseen tarvittavat asianmukaiset olosuhteet kasvun ja kehityksen DNA-materiaalin.

Suorittamaan PCR-käyttää 25-30 toistoa, joka koostuu kolmesta vaiheesta: denaturointi- ja venymä.

Analysoida polimezarnoy ketjureaktio käyttämällä erityistä laitetta - cycler. Nykyaikaiset laitteet voit asentaa tarvittavat lämmitys ja jäähdytys putket ohjelma poistaa virheitä diagnoosin.

Mihin hakemus diagnoosin?

Polimezarnoy ketjureaktio menetelmää käytetään eri lääketieteen aloilla:

• Oikeuslääketieteen käyttää sitä geneettisen materiaalin, kuten hiusten, sylkeä tai verta;
• PCR-analyysi veren auttaa genotyypin, esimerkiksi havaitsemiseksi yksittäisten geneettisen istutettu vasteena tiettyä lääkettä;
• menetelmällä määritetty perhesiteet ihmisten välillä;
• halutuin-PCR-menetelmällä on tullut lääketieteellisessä diagnostiikassa määrittämiseksi erilaisten tarttuvien tautien.

Mitä infektiot paljastaa PCR?

Siten, lääke on jo pitkään käytetty onnistuneesti PCR-analyysi. Mikä on se, olemme jo oppineet. Ja jotkut taudinaiheuttajia voidaan havaita se? PCR diagnosoitu seuraavat infektiot :

• hepatiitti A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidiaasi;
• klamydia;
• mykoplasmoosin;
• bakteerivaginoosi;
• tarttuva mononukleoosi;
• trichomoniasis;
• HPV-infektio;
• tuberkuloosi;
• herpesinfektio 1. ja 2. tyyppi;
• Helicobacter pylori-infektio;
• sytomegalovirus;
• kurkkumätä;
• salmonelloosiin;
• HIV-infektio.

Myös, PCR-menetelmiä käytetään syövän diagnoosissa.

Menetelmän edut

Diagnostisella PCR: llä on useita etuja:

1. Korkea herkkyys. Vaikka vain muutamia DNA-molekyylejä, mikro-organismi, PCR-analyysillä, määritetään infektion läsnäolon. Se auttaa menetelmä kroonisten ja piilevien esiintyviä tauteja. Usein tällaisissa tapauksissa, mikro-organismi on viljelemätöntä muilla tavoin.
2. Tutkiakseen tahansa sopivasta materiaalista, kuten syljen, veren, seksuaalinen valinta, hiukset, epiteelisolujen. Yleisin on verikoe ja urogenitaalimuutoksia moppi PCR.

3. Vaadi laajennettu kasvattamalla. Automatisoitu prosessi diagnostiikan avulla saada tutkimuksen tulokset jälkeen 4-5 tuntia.
4. Menetelmä on lähes täysin aito. Tallentaa vain yksittäisiä tapauksia vääriä negatiivisia tulokseen.
5. Kyky tunnistaa useita taudinaiheuttajia yksi näyte materiaalia. Tämä ei vain nopeuttaa prosessia taudinmääritys, mutta myös vähentää merkittävästi materiaalikustannuksia. Usein lääkäri määrää kattava analyysi PCR. Hintakeruun, joka koostuu määritetään kuudesta taudinaiheuttajia, on noin 1500 ruplaa.

Suosituksia valmistelua analyysiä varten

Tulokset voimassa PCR tutkimuksia on testattava, suositusten johdosta alustavan valmistelut diagnoosin:

1. Ennen toimituksen sylki pitäisi olla syömättä ja huumeiden 4 tuntia ennen näytteenottoa materiaaliin. Välittömästi ennen menettelyn, huuhtele suusi keitetyllä vedellä.
2. Edellä esitetyt säännöt on ohjattu ja kun otetaan näyte posken sisäpinnalle. Huuhtelun jälkeen on suositeltavaa suorittaa kevyt hieronta iholla vapauttamaan eturauhasen eritteiden.
3. Virtsa kerätään yleensä kotona. Voit tehdä tämän, sinun täytyy tehdä perusteellinen wc sukupuolielimiä. Steriilissä muoviastiassa on tarpeen kerätä 50-60 ml virtsaa. Se suositella naisille lisätä tamponi emättimeen, ja miehet niin paljon kuin mahdollista vetää ihopoimuun varmistaa puhtauden materiaalia. Et voi ottaa materiaalia aikana kuukautiset.
4. Siittiöiden kuljettamiseen pidättäydyttävä yhdynnässä 3 päivää ennen materiaalin keräämiseen. Myös lääkärit kehotetaan luopumaan saunan ja kuuma kylpy, alkoholin ja mausteinen elintarvikkeita. 3 tuntia ennen on tarpeen, jotta pidättäytyä virtsaamista.
5. Siirtää virtsa- kokeena, esimerkiksi jos analyysi on klamydia PCR, sekä naisten että miesten suositellaan seksuaalinen loput 3 päivää. 2 viikkoa ennen analyysiä ei voi ottaa antibiootteja. Viikon sinun täytyy lopettaa intiimi geelejä, voiteita, emätinsupot, douching. 3 tuntia ennen tutkimusta tulisi pidättäytyä virtsaamista. Kuukautisten aikana aita materiaali ei suoriteta, vain 3 päivän kuluttua päättymisestä tarkkailu voi urogenitaalimuutoksia kokeena.

PCR raskauden aikana

Odotusaika vauva, monet tartuntataudit, sukupuolitaudeista, ovat erittäin vaarallisia normaaliin sikiön kehitykseen. Sukupuolitaudit voivat laukaista kohdunsisäinen kehitys, keskenmenon tai ennenaikaisen synnytyksen, synnynnäisiä epämuodostumia lapsen. Siksi on tärkeää saada raskauden alkuvaiheessa seulonta PCR. Pass analyysi on tarpeen rekisteröityessään - enintään 12 viikkoa.

Aidan aine tulee kohdunkaulakanavan erityisellä harjat. Menettely on kivuton eikä aiheuta vaaraa lapselle. Normaalisti raskauden aikana analysoidaan Chlamydia PCR-menetelmää sekä ureaplasmosis, mykoplasmoosin, sytomegalovirus, herpes, papilloomavirus. Tällaista tutkimusta monimutkainen kutsutaan PCR-6.

PCR-diagnoosia varten HIV

Johtuen siitä, että menetelmä polymeraasiketjureaktion on erittäin herkkä muutokset kehossa ja edellytykset diagnoosi, monet tekijät voivat vaikuttaa lopputulokseen. Näin ollen PCR-analyysi HIV-infektio ei ole luotettava menetelmä, sen tehokkuus - 96-98%. Jäljellä 2-4%: n testi antaa vääriä positiivisia tuloksia.

Mutta joissakin tilanteissa ilman PCR diagnoosi HIV ei voi tehdä. Yleensä se tapahtuu ihmisille vääriä negatiivisia ELISA. Nämä luvut osoittavat, että henkilö ei ole vielä kehittynyt vasta-aineita viruksen ja ei voida havaita ilman määrän lisääminen useita. Että tämä voidaan saavuttaa suorittamalla verikoe PCR-menetelmällä.

Lisäksi tarvitaan diagnoosi lasten ensimmäisen elinvuoden, syntynyt HIV-positiivisille äideille. Menetelmä on ainoa tapa määritellä luotettavasti tilan lapsen.

PCR-diagnoosia varten hepatiitti

Polymeraasiketjureaktio menetelmä mahdollistaa DNA: n ilmaisemiseksi viruksen hepatiitti A, B, C, hyvin ennen vasta-aineiden muodostumisen ja infektion tai oireiden alkamisesta. Erityisen tehokas on PCR-analyysi hepatiitti C, koska 85% tällaisen taudin ovat oireettomia ja ilman ajoissa hoitoon muuttuu krooniseksi.

Havaita ajoissa taudinaiheuttajan auttaa välttämään komplikaatioita ja pitkäaikaista hoitoa.

Integroitu PCR-seulonta

Kattavat PCR-analyysi: mitä se on? Tämä seulontamenetelmä polimezarnoy ketjureaktio, joka sisältää määrittämiseksi samanaikaisesti useiden lajien infektio: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, trichomonas, sytomegalovirus, Ureaplasma urealitikum, herpes 1. ja 2. tyypin, tippuri papilloomavirusta. Hinta tämä diagnoosi vaihtelee 2000 ja 3500 ruplaa. riippuen klinikan, materiaaleja ja laitteita, sekä tyypin analyysi: laadullinen tai määrällinen. Mitä tarvitaan sinun tapauksessa - lääkäri päättää. Joissakin tapauksissa vain yksinkertaisesti havaita taudinaiheuttajan toisissa, kuten HIV, tärkeä rooli kvantitatiivisen tiitteri. jäljempänä "PCR-analyysi 12" diagnoosissa kaikki edellä patogeenien tutkimus.

Selvittämisessä analyysitulokset

Transkriptio PCR-analyysi on yksinkertaista. On vain 2 indeksi mittakaavassa - "positiivinen" ja "negatiivinen." Havaitessaan taudinaiheuttaja voi lääkäreitä 99%: n varmuudella nnen vahvistaa taudin esiintymisen ja aloittaa potilaan hoitoon. Kvantitatiivisessa menetelmässä määritetään infektion vastaavan sarakkeen indeksi havaittujen bakteerien määritetään. Vain lääkäri voi määrittää taudin levinneisyys ja määrätä tarvittavan hoidon.

Joissakin tapauksissa, esimerkiksi määritettäessä HIV-infektio PCR: llä, jossa on negatiivinen tulos, on lisäselvitystarvetta vahvistaa nämä luvut.

Mistä saada testattu?

Jossa pass-PCR-analyysillä julkisella klinikalla tai yksityinen laboratorio? Valitettavasti kuntien hoitolaitosten laitteet ja menetelmät ovat usein vanhentuneita. Siksi on parempi antaa etusija yksityisten laboratorioiden nykyaikaisten laitteiden ja korkeasti koulutettua henkilöstöä. Lisäksi yksityisellä klinikalla saat tuloksia paljon nopeammin.

Moskovassa, monet yksityiset laboratoriot tarjoavat PCR-analyysiä varten erilaisten infektioiden. Esimerkiksi sellaisissa klinikat "Vita", "Integrated Clinic," "Happy Family", "Uro-Pro", suoritetaan PCR-analyysillä. Tutkimuksen hinta on 200 ruplaa. määrittämiseksi taudinaiheuttaja.

Tästä voidaan päätellä, että infektiotautien diagnosointiin PCR useimmissa tapauksissa on nopea ja luotettava tapa havaita taudinaiheuttajan kehossa alkuvaiheessa infektion. Silti joissakin tapauksissa valita muita menetelmiä diagnoosi. Kulloinkin tarvittavat tällainen tutkimus voi olla vain asiantuntija. PCR-analyysillä Salauksen purkaminen edellyttää myös ammattimaista. Seuraa lääkärin neuvoja ja eivät anna omia kokeita, joita ei tarvita.